· polyacrylamidgel rhaid gan monomer acrylamid, polymerization deunydd cychwyn, catalydd, a hawl cymysgedd halen a byffer gyda'i gilydd.
· acrylamida BIS (N, N '- acrylamid dwbl methylene) yw'r ffurf monomer matrics gel.
· amoniwm persulfate dechrau proses polymerization gludiog.Mae llunio'r glud yn gofyn am 10% o doddiant persylffad amoniwm wedi'i baratoi mewn dŵr.Roedd y rhan fwyaf o'r wybodaeth yn nodi angen am ddefnydd gweithredol.Fodd bynnag, gellir gosod yr ateb 10% ar 4 ℃ am sawl wythnos heb golli gweithgaredd sylweddol.Gwnewch hyd at 10 ml a'i daflu pan fydd y glud yn methu ag agregu.
Awgrym: Canran yacrylamidwrth ddilyniannu nid yw glud a glud protein yr un peth.Os ydych chi'n defnyddio acrylamid parod: hydoddiant BIS, gwnewch yn siŵr eich bod chi'n cael y botel gywir.
· Mae TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) yn gatalydd, mewn potel frown, wedi'i osod yn yr oergell.Ychwanegwch ychydig cyn arllwys glud.
· electrofforesis polyacrylamid a ddefnyddir mewn electrofforesis dylid golchi gwydr cyn ac ar ôl pob tro.Ar ôl electrofforesis, golchwch â brwsh meddal a brethyn mewn dŵr poeth â sebon, rinsiwch â dŵr distyll a sefyll i sychu.
· Gall lleithder a llwch achosi gyda pholymer gwag.Cyn electrofforesis, glanhewch y plât gwydr gyda glanhawr gwydr a'i sychu â brwsh meddal.Golchwch â dŵr distyll a'i sychu'n drylwyr gyda sychwr papur.Mae rinsio â 70% ethanol cyn sychu â phapur yn helpu i lanhau a chyflymu'r sychu.Ychwanegwch samplau o acrylamid yn olynol: BIS, dŵr, hydoddiant byffer, persylffad amoniwm, TEMED.Ysgwydwch yn dda ac arllwyswch ar unwaith.
Nid oes angen degass polyacrylamide cyn polymerization.(Roedd acrylamid yn arfer cael ei roi mewn gwactod i gael gwared ar swigod oherwydd bod ocsigen yn atal polymerization.)
Awgrymiadau sampl pwynt gludo llorweddol.
· rhowch ddarn o bapur du yn y blwch gwaelod, cefndir du i wneud twll sampl i'w weld yn gliriach.
· byffer wedi'i lenwi â thanc glud, ychydig dros y colloid.
· os oes gan yr ymyl olau, trowch y goleuadau ymlaen, gadewch i'r golau ddisgleirio colloid.Tynnwch y sampl yn y bibed.
· defnyddio dyfais pibio awtomatig.
· mewn 10-200 mu gellir defnyddio 1 pwynt symud hylif yn y rhan fwyaf o'r pwyntiau ar y sampl.Ar gyfer tyllau sampl bach iawn (llai na 10μ1), mae'r pen pibed hir a ddefnyddir ar gyfer dilyniannu glud yn fwy cyfleus.
· pibio sydd newydd gael ei drochi yn y sampl, gan fewnanadlu hylif sy'n symud yn araf.Gall y sampl ymddangos yn gludiog â glyserin, a gall pwmpio cyflym dynnu swigod aer i mewn i ben y pibed.
· Bydd samplau ar ôl mewnanadlu pen pipetting, yn symud pen hylif yn ysgafn ar ymyl y bibell neu sychu papur sugno pen hylif y tu allan i'r defnynnau.Byddwch yn ofalus i beidio â sugno'r sampl.
Rhowch y sampl yn y twll sampl
· dyfais pipetio i gadw ychydig o bwysau, gwnewch y samplau ychydig yn symud pen hylif gorlif.
· mae'r pen pibio a fewnosodir yn y byffer, ychydig yn uwch na'r tyllau sbot, yn cynnal pwysau positif.Gellir gosod blaen y bibed mewn twll bach.
· yn araf ac yn gyson y samplau allan.Rhoddir blaen y pibed uwchben y twll sampl pwynt, a bydd y sampl yn suddo i'r twll.Gadewch i'r sampl suddo i lenwi'r twll sampl yn lle gwthio i mewn.
· unwaith y bydd y gostyngiad olaf o sampl gyda phen hylif, hylif yn symud i'r ail goes, yn araf yn codi'r symudiad hylif, yn symud allan o byffer
Sut i wneud samplu glud fertigol?
· tyllau sampl pwynt glud fertigol wedi'u ffurfio rhwng dau ddarn o wydr.Mewn glud tenau iawn, ni ellir gosod y pen pibed hyd yn oed rhwng dau blât gwydr.Gwyliwch y glyserin!Rhowch ben y pibed dros y twll sampl a bydd y sampl yn suddo i'r twll.
· sampl pwynt o'r blaen, gofalwch eich bod yn rhoi pwynt fertigol twll sampl gel polypropylen acyl yn rinsio lân.Golchwch yr acrylamid heb ei bolymereiddio i ffwrdd a'r dŵr a all ymddangos ar waelod y twll sampl.Gall y dŵr wneud y twll sampl yn sylweddol llai.Defnyddiwch chwistrell 25ml neu 50ml a nodwydd 18-medr.Arllwyswch y byffer electrofforesis a fflysio'r twll sampl yn ofalus.
· gall fod yn anodd gweld y twll sampl, ond ar yr un pryd, mae'r gweddill yn hawdd.Os oes tyllau gormodol, gellir profi'r byffer sampl gyda glas bromophenol.
Amser post: Maw-31-2023