· polyacrylamidrhaid i'r gel gael ei gyfuno â monomer acrylamid, deunydd cychwyn polymerization, catalydd, a chymysgedd halen a byffer.
· acrylamida BIS (N,N'-methylene dwbl acrylamid) yw'r matrics gel ffurf monomer.
· proses polymerization gludiog cychwyn persulfad amoniwm. Mae llunio'r glud yn gofyn am doddiant persulfad amoniwm 10% wedi'i baratoi mewn dŵr. Roedd y rhan fwyaf o'r wybodaeth yn dangos bod angen ei ddefnyddio'n weithredol. Fodd bynnag, gellir gosod y toddiant 10% ar 4℃ am sawl wythnos heb golli gweithgaredd yn sylweddol. Gwnewch hyd at 10 ml a thaflwch pan fydd y glud yn methu ag agregu.
Awgrym: Canran yacrylamidWrth ddilyniannu, nid yw glud a glud protein yr un peth. Os ydych chi'n defnyddio hydoddiant acrylamid: BIS parod, gwnewch yn siŵr eich bod chi'n cael y botel gywir.
· Mae TEMED (N, N, N', N'- tetramethyl ethylenediamine) yn gatalydd, mewn potel frown, wedi'i osod yn yr oergell. Ychwanegwch ychydig cyn tywallt y glud.
· Dylid golchi gwydr a ddefnyddir mewn electrofforesis polyacrylamid cyn ac ar ôl pob tro. Ar ôl electrofforesis, golchwch gyda brwsh meddal a lliain mewn dŵr sebonllyd poeth, rinsiwch â dŵr distyll a gadewch i sychu.
· gall lleithder a llwch achosi gyda polymer gwag. Cyn electrofforesis, glanhewch y plât gwydr gyda glanhawr gwydr a'i sychu â brwsh meddal. Golchwch â dŵr distyll a sychwch yn drylwyr gyda chadach papur. Mae rinsio ag ethanol 70% cyn sychu â phapur yn helpu i lanhau a chyflymu sychu. Ychwanegwch samplau o acrylamid yn olynol: BIS, dŵr, hydoddiant byffer, persulfad amoniwm, TEMED. Ysgwydwch yn dda ac arllwyswch ar unwaith.
Nid oes angen dadnwyo polyacrylamid cyn polymerization. (Arferai acrylamid gael ei roi mewn gwactod i gael gwared â swigod oherwydd bod ocsigen yn atal polymerization.)
Awgrymiadau sampl pwynt glud llorweddol.
· rhowch ddarn o bapur du yn y blwch gwaelod, cefndir du i wneud twll sampl i weld yn gliriach.
· byffer wedi'i lenwi â thanc glud, ychydig dros y colloid.
· os oes golau ar yr ymyl, trowch y goleuadau ymlaen, gadewch i'r golau ddisgleirio colloid. Tynnwch y sampl i'r piped.
· gan ddefnyddio dyfais pipetio awtomatig.
· mewn 10-200 mu 1 gellir defnyddio pwynt symud hylif yn y rhan fwyaf o'r pwyntiau ar y sampl. Ar gyfer tyllau sampl bach iawn (llai na 10μ1), mae'r pen piped hir a ddefnyddir ar gyfer glud dilyniannu yn fwy cyfleus.
· pipetio wedi'i drochi yn y sampl, gan anadlu hylif sy'n symud yn araf. Gall y sampl ymddangos yn gludiog gyda glyserin, a gall pwmpio cyflym dynnu swigod aer i mewn i ben y piped.
· Ar ôl anadlu pen y bibell i mewn i'r samplau, bydd pen yr hylif yn symud yn ysgafn ar ymyl y bibell neu'n sugno pen yr hylif y tu allan i'r diferion. Byddwch yn ofalus i beidio â sugno'r sampl.
Rhowch y sampl yn y twll sampl
· dyfais pipetio i gadw ychydig o bwysau, gwneud i'r samplau symud ychydig i ben hylif gorlifo.
· mae'r pen pipetio wedi'i fewnosod yn y byffer, ychydig yn uwch na'r tyllau man, yn cynnal pwysau positif. Gellir mewnosod blaen y piped i dwll bach.
· yn araf ac yn gyson y samplau allan. Gosodir blaen y piped uwchben twll pwynt y sampl, a bydd y sampl yn suddo i'r twll. Gadewch i'r sampl suddo i lenwi twll y sampl yn lle gwthio i mewn.
· unwaith y bydd y diferyn olaf o sampl gyda phen hylif, bydd yr hylif yn symud i'r ail goes, gan godi'r symudiad hylif yn araf, symud allan o'r byffer
Sut i wneud samplu glud fertigol?
· tyllau sampl pwynt glud fertigol wedi'u ffurfio rhwng dau ddarn o wydr. Mewn glud tenau iawn, ni ellir hyd yn oed fewnosod pen y piped rhwng dau blât gwydr. Gwyliwch y glyserin! Rhowch ben y piped dros dwll y sampl a bydd y sampl yn suddo i'r twll.
· pwynt sampl o'r blaen, gwnewch yn siŵr bod pwynt fertigol twll sampl gel polypropylen acyl yn cael ei rinsio'n lân. Golchwch yr acrylamid heb ei bolymereiddio a'r dŵr a all ymddangos ar waelod twll y sampl i ffwrdd. Gall y dŵr wneud twll y sampl yn sylweddol llai. Defnyddiwch chwistrell 25ml neu 50ml a nodwydd 18-mesurydd. Arllwyswch y byffer electrofforesis i mewn a fflysiwch y twll sampl yn ofalus.
· gall fod yn anodd gweld twll y sampl, ond ar yr un pryd, mae'r gweddill yn hawdd. Os oes gormod o dyllau, gellir profi'r byffer sampl gyda glas bromoffenol.
Amser postio: Mawrth-31-2023