· polyacrylamidRhaid i Gel gan fonomer acrylamid, deunydd cychwyn polymerization, catalydd, a hawl halen a chymysgedd clustogi gyda'i gilydd.
· acrylamida bis (n, n '- acrylamid dwbl methylen) yw'r matrics gel ffurf monomer.
· Amoniwm Persulfate Cychwyn Proses Polymerization Gludiog. Mae angen hydoddiant amoniwm persulfate 10% mewn dŵr ar gyfer llunio'r glud. Roedd y rhan fwyaf o'r wybodaeth yn dangos bod angen defnydd gweithredol. Fodd bynnag, gellir gosod yr ateb 10% yn 4 ℃ am sawl wythnos heb golli gweithgaredd yn sylweddol. Gwneud hyd at 10 ml a'i daflu pan fydd y glud yn methu ag agregu.
Awgrym: y ganran oacrylamidNid yw gludo glud a glud protein yr un peth. Os ydych chi'n defnyddio acrylamid premade: Datrysiad BIS, gwnewch yn siŵr eich bod chi'n cael y botel iawn.
Mae TEMED (N, N, N ', N'- Tetramethyl Ethylenediamine) yn gatalydd, mewn potel frown, wedi'i osod yn yr oergell. Ychwanegwch ychydig cyn arllwys glud.
· Dylai electrofforesis polyacrylamid a ddefnyddir gwydr mewn electrofforesis gael ei olchi cyn ac ar ôl bob tro. Ar ôl electrofforesis, golchwch gyda brwsh meddal a brethyn mewn dŵr sebonllyd poeth, rinsiwch â dŵr distyll a sefyll i sychu.
· Gall lleithder a llwch achosi gyda pholymer gwag. Cyn electrofforesis, glanhewch y plât gwydr gyda glanhawr gwydr a'i sychu â brwsh meddal. Golchwch â dŵr distyll a'i sychu'n drylwyr gyda weipar papur. Mae rinsio gyda 70% ethanol cyn sychu gyda phapur yn helpu i lanhau a chyflymu sychu. Ychwanegwch samplau o acrylamid yn olynol: bis, dŵr, toddiant byffer, amoniwm persulfate, temed. Ysgwyd yn dda ac arllwys ar unwaith.
Nid oes angen dadseilio polyacrylamid cyn polymerization. (Arferai acrylamid gael ei roi mewn gwagle i gael gwared ar swigod oherwydd bod ocsigen yn atal polymerization.)
Awgrymiadau sampl pwynt glud llorweddol.
· Rhowch ddarn o bapur du yn y blwch gwaelod, cefndir du i wneud rhywfaint o dwll sampl i'w weld yn gliriach.
· Byffer wedi'i lenwi â thanc glud, ychydig dros y colloid.
· Os oes golau ar yr ymyl, trowch y goleuadau ymlaen, gadewch i'r golau ddisgleirio colloid. Tynnwch y sampl i'r pibed.
· Defnyddio dyfais pibetio awtomatig.
· Mewn 10-200 MU 1 gellir defnyddio pwynt symud hylif yn y rhan fwyaf o'r pwyntiau ar y sampl. Ar gyfer tyllau sampl bach iawn (llai na 10μ1), mae'r pen pibed hir a ddefnyddir i ddilyniannu glud yn fwy cyfleus.
· Mae pibetio newydd ymgolli yn y sampl, gan anadlu hylif sy'n symud yn araf. Gall y sampl ymddangos yn ludiog gyda glyserin, a gall pwmpio cyflym dynnu swigod aer i mewn i ben y pibed.
· Samplau ar ôl anadlu pen pibetio, bydd yn symud pen hylif yn ysgafn ar ymyl y bibell neu'r papur sychu sugno pen hylif y tu allan i'r defnynnau. Byddwch yn ofalus i beidio â sugno'r sampl.
Rhowch y sampl yn y twll sampl
· Dyfais pibetio i gadw ychydig o bwysau, gwneud i'r samplau symud ychydig yn gorlifo pen hylif.
· Mae'r pen pibetio wedi'i fewnosod yn y byffer, ychydig yn uwch na'r tyllau sbot, yn cynnal pwysau positif. Gellir mewnosod blaen y pibed mewn twll bach.
· Yn araf ac yn gyson y samplau allan. Mae'r domen pibed wedi'i gosod uwchben y twll sampl pwynt, a bydd y sampl yn suddo i'r twll. Gadewch i'r sampl suddo i lenwi'r twll sampl yn lle gwthio i mewn.
· Unwaith y bydd y diferyn olaf o sampl gyda phen hylifol, bydd hylif yn symud i'r ail gymal, yn araf yn codi'r symud hylif, yn symud allan o byffer
Sut i wneud samplu glud fertigol?
· Tyllau sampl pwynt glud fertigol wedi'u ffurfio rhwng dau ddarn o wydr. Mewn glud tenau iawn, ni ellir mewnosod pen y pibed hyd yn oed rhwng dau blât gwydr. Gwyliwch y glyserin! Rhowch ben y pibed dros y twll sampl a bydd y sampl yn suddo i'r twll.
· Sampl pwynt o'r blaen, gwnewch yn siŵr eich bod yn rhoi pwynt fertigol twll sampl gel acyl polypropylen wedi'i rinsio'n lân. Golchwch yr acrylamid heb ei drin a'r dŵr a all ymddangos ar waelod y twll sampl. Gall y dŵr wneud y twll sampl yn sylweddol llai. Defnyddiwch chwistrell 25ml neu 50ml a nodwydd 18 medr. Arllwyswch y byffer electrofforesis i mewn a fflysio'r twll sampl yn ofalus.
· Gall fod yn anodd gweld y twll sampl, ond ar yr un peth, mae'r gweddill yn hawdd. Os oes gormod o dyllau, gellir profi'r byffer sampl â glas bromophenol.
Amser Post: Mawrth-31-2023